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概述
采用实时荧光PCR技术，针对致泻大肠埃希氏菌（DEC）特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中，与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号，荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现致泻大肠埃希氏菌（DEC）在核酸水平上的菌株鉴定。
检测步骤
1、核酸提取
加热法：刮取一环菌落，悬浮于100μL的无菌水中，漩涡震荡10s（如果菌落未能均匀分散，可适当延长震荡时间），95℃或沸水浴5min，冷却至室温，12000rpm离心5min，吸取上清。
试剂盒法：可使用商品化的试剂盒提取细菌的基因组DNA。
2、反应体系配置
从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，取20μL置于PCR管或PCR板中，然后各取模板5μL分别加入PCR管或PCR板中（每种模板要使用五种预混液），盖好管盖或板膜，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
3、PCR扩增
PCR管或PCR板置于PCR仪上，推荐反应程序设定如下：反应体系为25μL，在第二步每个循环60℃时检测荧光信号，检测通道选择FAM、HEX（VIC）、CY5。
注：使用ABI系列PCR仪器，如果不添加ROX
注意事项
1、实验前请仔细阅读说明书，规范操作。
2、本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行混用。
3、基因变异可能会导致假阴性结果。
4、实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染都可能会造成假阳性结果。
5、恰当处理实验过程中的废弃物和扩增产物。
致泻大肠埃希氏菌（DEC）核酸检测试剂盒（PCR-探针法）