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山东美正生物科技有限公司

公司产品涉及生物毒素、重金属、农/兽药残留、转基因、营养成...

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助力国家风险监测,美正16种真菌毒素13C同位素混标上新
发布时间:2022-09-29        浏览次数:181        返回列表
 本应用采用美正MUTIPURE多功能净化仪结合高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)建立了婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的检测方法。

 

样品经磷酸盐缓冲溶液提取,肝素亲和柱富集净化,C4色谱柱分离,外标法进行定量。结果表明,添加量为400 mg/kg时,乳铁蛋白回收率在85% ~ 90%,能够满足检测要求。

 

截图20220926112412.png

 

实验部分 

 

主要仪器设备

 

Aglient 1260高效液相色谱-紫外检测器。

MUTIPURE多功能净化仪。

 

试剂材料

 

0.1%三氟乙酸溶液:量取三氟乙酸1 mL,加水定容至1000 mL,混匀;

 

结合缓冲液:称取30.083 g十二水合磷酸氢二钠,2.496 g二水合磷酸二氢钠,加900mL水溶解,加入20mL乳铁蛋白提取试剂A(50倍浓缩液,肝素亲和柱包装盒中),后用水定容至1000 mL混匀;

 

洗脱液:称取7.52 g磷酸氢二钠,0.624 g磷酸二氢钠,29.2 g氯化钠,加400 mL水溶解,定容至500 mL混匀;

 

乳铁蛋白标准储备液(10 mg/mL):准确称取按其纯度折算为质量的乳铁蛋白各0.1 g于10 mL容量瓶中,加水溶解后定容至刻度;

 

肝素亲和柱:3 mL(P/N:QC0140)。

 

样品制备

 

1、样品提取

 

精确称量2.5 g样品于离心管内,加入结合缓冲液30 mL,涡旋振荡至样本全部溶解,再加入结合缓冲液定容至50 mL,混匀,11000 r/min 4℃离心15 min,立即吸取25 mL中间层试液于另一50 mL离心管内,11000 r/min 4℃离心15 min,立即取出中间层至15 mL离心管,恢复至室温后待净化。

 

2、样品净化

 

将上述待净化液按顺序连接上样管,再取15 mL离心管依次置于收集架上,将肝素亲和柱连接在MUTIPURE多功能净化仪上(如下图),按照下表的指令设置方法,启动仪器,由仪器自动完成净化步骤。

 

肝素亲和柱连接在MUTIPURE多功能净化仪


净化仪.png

 


MUTIPURE多功能净化仪仪器参数


zhong1.jpg


后处理:涡旋混匀,离心5 min,取上清液上机待测。

 

 

色谱条件

 

 

色谱柱:DAISOPAK SP-300-5-C4-BI0,4.6 × 250 mm;

 

流动相A :0.1%三氟乙酸溶液;

 

流动相B : 乙腈;

 

柱  温:30℃;

 

波  长:280 nm;

 

进样量:30 µL;

 

流  速:1 mL/min;

梯度洗脱见下表。

 

液相色谱梯度洗脱条件


zhong2.jpg

 

实验结果

 

乳铁蛋白加标回收实验结果(添加水平400 mg/kg,n=4)

yin6.jpg

 

实验谱图

40 乳铁蛋白标准溶液色谱图.png

40 µg/mL乳铁蛋白标准溶液色谱图

婴幼儿奶粉基质空白色谱图.png


婴幼儿奶粉基质空白色谱图


400 婴幼儿奶粉基质加标色谱图.png

 

400 mg/kg婴幼儿奶粉基质加标色谱图

 

实验结论

 

本实验采用MUTIPURE多功能净化仪结合高效液相色谱-紫外检测器对于加标量为400 mg/kg的婴幼儿奶粉进行检测。

 

结果表明,使用MUTIPURE多功能净化仪对婴幼儿奶粉基质进行净化,乳铁蛋白回收率满足要求且RSD小于10%,说明MUTIPURE多功能净化仪适用于婴幼儿奶粉中乳铁蛋白的检测,且方法稳定。

 

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